PCR實驗室中的氣溶膠污染來源于兩個過程:樣本制備過程和PCR擴增過程。
在樣本制備過程中,樣本液體面與空氣摩擦就可形成氣溶膠,在操作時比較劇烈地搖動反應管、開蓋時、吸樣時及加樣器的反復吸樣都可能形成氣溶膠而污染;PCR擴增過程可以引起實驗室中擴增產物的累積,通常一次典型的PCR擴增可以產生109拷貝的靶序列,如果氣溶膠化,甚至的氣溶膠都會含有106拷貝的擴增產物。
如果不加以控制,在短期內累積的氣溶膠化擴增產物就會污染實驗室中的試劑、儀器設備和通風系統,造成嚴重的實驗室污染,導致檢驗樣本出現假陽性結果,使臨床做出錯誤的判斷和決策,進而引發后續一系列的事故和恐慌。







PCR技術的問世使病原體檢測能夠快速、方便地進行。由于PCR技術假陽性率太高,只要有微量病原體存在就可得到陽性結果,這并不能作為診斷依據,只有當一定數量的病原體存在時才有臨床意義。因此,對模板準確定量顯得特別重要,應用熒光技術PCR就能夠快速、準確地得到結果。對于解決學檢測的“窗口期”問題,判斷疾病是否處于隱性或亞臨床狀態,以及檢測不能判定是現癥還是既往時,均可利用PCR進行確定。
示例:新型冠狀病毒核酸檢測。
方法學:熒光PCR法。
用途:用于體外定性檢測新型冠狀病毒的疑似病例、疑似聚集例患者、其他需要進行新型冠狀病毒診斷或鑒別。

檢測基因:新型冠狀病毒(2019-nCoV)ORFlab和N基因、E基因。
標本類型:上呼吸道標本:咽拭子、鼻拭子;下呼吸道標本:呼吸道抽取物、肺泡灌洗液樣本、肺組織活檢標本。
檢測流程:
(1)核酸檢測前的生物安全防護(工作人員個人三級防護的穿戴)→(2)樣本的滅活(56℃滅活30分鐘)→(3)樣本的核酸提取(手工、核酸提取儀)→(4)PCR體系的配制和模板加樣→(5)上機檢測及結果分析→(6)檢測后的消毒。
其他病原體檢測:HIV、甲乙丙肝、HPV、肺支、肺衣、EB病毒、腺病毒、胞病毒、甲乙流、埃博拉病毒、B族鏈球菌。
適合開展的醫院和:兒童醫院、婦幼、兒檢所、第三方、各種級別的有需求的醫院。
輔料的質檢應結合實際工作中可能用到的場景,并非越苛刻越好,需要每個實驗室結合自身情況來設計和調整文中提到的參數。
1.離心管
(1)滲漏密閉性:將n個離心管加入半量墨汁,蓋好蓋子后放入水中,浸泡30min,沒有墨汁滲出為合格。
(2)離心密閉性:將n個離心管加入半量純水,放入離心機,10000 rpm,30min,管蓋未崩開未漏液為合格。
(3)熱密閉性:將n個離心管加入半量純水,蓋好蓋子稱重后放入金屬浴中,65℃或90℃(巴氏消毒),30min,再進行稱重,離心管未變形,管蓋未崩開未漏液,前后重量未變化為合格。
(4)冷密閉性:將n個離心管加入半量純水,放入-20℃冰箱,24h,離心管未變形,管蓋未崩開未漏液為合格。

(5)污染物質檢:將n個離心管分別加入半量陰性純水,蓋好蓋子渦旋1 min后靜置5min,吸取純水作為模板進行擴增,qPCR無擴增為合格。
(6)抑制物質檢:將n個離心管分別加入弱陽性質控物,室溫靜置5min,然后進行提取;RNA核酸,DNA核酸,室溫靜置5min,作為模板進行擴增,qPCR擴增未被抑制為合格。