(1)滲漏密閉性:將n個PCR管加入半量墨汁,蓋好蓋子后放入水中,浸泡30min,沒有墨汁滲出為合格。
(2)離心密閉性:將n個PCR管加入半量純水,放入離心機,1000 rpm,30min,管蓋未崩開未漏液為合格。
(3)熱密閉性:將n個PCR管加入半量純水,蓋好蓋子稱重后放入PCR儀,設置一個常用的PCR程序,程序運行完畢后,再進行稱重,PCR管未變形,管蓋未崩開未漏液,前后重量未變化為合格。
(4)冷密閉性:將n個PCR管加入半量純水,放入-20℃冰箱,24h,離心管未變形,管蓋未崩開未漏液為合格。
(5)污染物質檢:將n個PCR管加入半量陰性純水,蓋好蓋子渦旋1 min后靜置5min,作為模板進行擴增,qPCR無擴增為合格。
(6)抑制物質檢:將n個PCR管分別加入弱陽性質控物,室溫靜置5min,然后進行提取;RNA核酸,DNA核酸,室溫靜置5min,作為模板進行擴增,qPCR擴增未被抑制為合格。

(7)空白熒光通透性:對于qPCR,需要考察PCR管是否有非特異性熒光信號,將n個空PCR管,蓋好蓋子后放入PCR儀,設置一個常用的PCR程序,程序運行完畢后,qPCR無擴增為合格。
(8)陽性熒光通透性:對于qPCR,還需要考察PCR管是否會抑制熒光的通透性,將n個含弱陽性樣品和擴增試劑的PCR管,與確認無熒光干擾的PCR管,蓋好蓋子后放入PCR儀一同擴增,設置一個常用的PCR程序,程序運行完畢后,qPCR擴增未被抑制為合格。







①臨床標本中存在的大量待測微生物或待測靶核酸
②科研中得到的質粒
③以前分析研究的特定微生物或靶核酸
④大量存在于實驗環境中的特定微生物或靶核酸
⑤以前擴增產物的殘留污染,這也是 PCR 實驗室產生的將造成假陽性的“污染”。

PCR擴增可以引起實驗室中擴增產物的累積,通常一次典型的PCR
擴增可以產生109拷貝的靶序列,如果氣溶膠化,甚至的氣溶膠都會含有106拷貝的擴增產物。如果不加以控制,在短期內累積的氣溶膠化的擴增產物即會污染實驗室中的試劑、儀器設備和通風系統,從而造成嚴重的實驗室“污染”,出現大量的假陽性結果。
1.實驗室空調通風系統設計及壓力控制
PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求,但是為避免各個實驗區域間交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式。同時,要嚴格控制送、排風的比例以保證各實驗區的壓力要求。

2.污染的預防與控制
PCR實驗室設計的問題是如何避免污染。在實際工作中,常見的有以下幾種污染類型:擴增產物的污染;天然基因組DNA的污染;試劑的污染以及標本間的污染。由于一旦發生污染,實驗就必須停止,直到找到污染源為止,而且實驗結果必須作廢,需重新進行實驗。所以發生污染后再圍繞實驗室來尋找污染源不但耗時而且繁瑣,浪費人力物力。因此要避免污染,首先應是預防,而不是排除。