1、試劑儲存和準備區。貯存試劑和用于標本制備的消耗品等材料應當直接運送至試劑貯存和準備區，不能經過擴增檢測區，試劑盒中的陽性對照品及質控品不應當保存在該區，應當保存在標本制備區；

2、標本制備區。由于在樣本混合、核酸純化過程中可能會發生氣溶膠所致的污染，可通過在本區內設立正壓條件，避免從鄰近區進入本區的氣溶膠污染。為避免樣本間的交叉污染，加入待測核酸后，必須蓋好含反應混合液的反應管。對具有潛在危險性的材料，必須在生物安全柜內開蓋，并有明確的樣本處理和滅活程序；

3、擴增區。為避免氣溶膠所致的污染，應當盡量減少在本區內的走動。必須注意的是，所有經過檢測的反應管不得在此區域打開；

4、擴增產物分析區。本區是的擴增產物污染來源，因此必須注意避免通過本區的物品及工作服將擴增產物帶出。廢液及用過的吸頭必須收集至HCl中，不能在實驗室內傾倒，浸泡后再放到垃圾袋中按程序處理。由于本區有可能會用到某些可致基因突變和有毒物質如化乙錠、酰胺、甲醛或性核素等，故應當注意實驗人員的安全防護；

5、注意物品流向，依次為：試劑準備區、樣本制備區、擴增區、產物分析區，不可逆行；

6、試劑準備區、樣本制備區和擴增區內的實驗用品應，并設置不同的標識、顏色等予以區分。

1、實驗應在超凈工作臺或者生物安全柜內進行；

2、實驗的過程中選擇尺寸的手套并能及時更換，在進出不同實驗區域或進行模板操作后都應更換實驗服、口罩、帽子及手套，以避免不同實驗區交叉污染；

3、裝有PCR試劑的反應管在打開之前應先瞬時離心，將管壁及管蓋上的液體離至管底，降低污染手套或加樣器的風險；謹慎開啟反應管，防止管內液體濺出或形成氣溶膠導致污染；需要高溫加熱的樣本，可采用封口膜進行PCR管蓋密封，避免管蓋應受熱而發生彈開；

4、吸加試劑和模板的操作應嚴格按照規范要求進行，遵守“慢吸快打”原則，盡量一次性完成，忌多次抽吸，以避免氣溶膠產生的交叉污染；

5、PCR試劑建議小量分裝，以減少反復凍融、重復取樣次數和反復使用過程中的試劑污染；多樣本PCR反應時，先配制反應混合液分裝至反應管中，加入樣本核酸，請勿同時開蓋，盡量保證單人單管，實現完全閉管操作；

6、實驗試劑應與樣品和PCR產物分開保存，不應放于同處；

7、PCR擴增實驗完成后及時將反應管取出，用一次性手套或者塑封袋將產物反應管包裹丟棄，保證管蓋緊閉；

8、實驗室自配試劑（去離子水、緩沖液等）和所有使用器具在使用之前均應高壓滅菌或紫外殺菌，尖、反應管等實驗耗材應一次性使用。

PCR技術的問世使病原體檢測能夠快速、方便地進行。由于PCR技術假陽性率太高，只要有微量病原體存在就可得到陽性結果，這并不能作為診斷依據，只有當一定數量的病原體存在時才有臨床意義。因此，對模板準確定量顯得特別重要，應用熒光技術PCR就能夠快速、準確地得到結果。對于解決學檢測的“窗口期”問題，判斷疾病是否處于隱性或亞臨床狀態，以及檢測不能判定是現癥還是既往時，均可利用PCR進行確定。

示例：新型冠狀病毒核酸檢測。

方法學：熒光PCR法。

用途：用于體外定性檢測新型冠狀病毒的疑似病例、疑似聚集例患者、其他需要進行新型冠狀病毒診斷或鑒別。

檢測基因：新型冠狀病毒（2019-nCoV）ORFlab和N基因、E基因。

標本類型：上呼吸道標本：咽拭子、鼻拭子；下呼吸道標本：呼吸道抽取物、肺泡灌洗液樣本、肺組織活檢標本。

檢測流程：

（1）核酸檢測前的生物安全防護（工作人員個人三級防護的穿戴）→（2）樣本的滅活（56℃滅活30分鐘）→（3）樣本的核酸提取（手工、核酸提取儀）→（4）PCR體系的配制和模板加樣→（5）上機檢測及結果分析→（6）檢測后的消毒。

其他病原體檢測：HIV、甲乙丙肝、HPV、肺支、肺衣、EB病毒、腺病毒、胞病毒、甲乙流、埃博拉病毒、B族鏈球菌。

適合開展的醫院和：兒童醫院、婦幼、兒檢所、第三方、各種級別的有需求的醫院。