1、試劑儲存和準備區。貯存試劑和用于標本制備的消耗品等材料應當直接運送至試劑貯存和準備區,不能經過擴增檢測區,試劑盒中的陽性對照品及質控品不應當保存在該區,應當保存在標本制備區;
2、標本制備區。由于在樣本混合、核酸純化過程中可能會發生氣溶膠所致的污染,可通過在本區內設立正壓條件,避免從鄰近區進入本區的氣溶膠污染。為避免樣本間的交叉污染,加入待測核酸后,必須蓋好含反應混合液的反應管。對具有潛在危險性的材料,必須在生物安全柜內開蓋,并有明確的樣本處理和滅活程序;

3、擴增區。為避免氣溶膠所致的污染,應當盡量減少在本區內的走動。必須注意的是,所有經過檢測的反應管不得在此區域打開;
4、擴增產物分析區。本區是的擴增產物污染來源,因此必須注意避免通過本區的物品及工作服將擴增產物帶出。廢液及用過的吸頭必須收集至HCl中,不能在實驗室內傾倒,浸泡后再放到垃圾袋中按程序處理。由于本區有可能會用到某些可致基因突變和有毒物質如化乙錠、酰胺、甲醛或性核素等,故應當注意實驗人員的安全防護;
5、注意物品流向,依次為:試劑準備區、樣本制備區、擴增區、產物分析區,不可逆行;
6、試劑準備區、樣本制備區和擴增區內的實驗用品應,并設置不同的標識、顏色等予以區分。







輔料的質檢應結合實際工作中可能用到的場景,并非越苛刻越好,需要每個實驗室結合自身情況來設計和調整文中提到的參數。
1.離心管
(1)滲漏密閉性:將n個離心管加入半量墨汁,蓋好蓋子后放入水中,浸泡30min,沒有墨汁滲出為合格。
(2)離心密閉性:將n個離心管加入半量純水,放入離心機,10000 rpm,30min,管蓋未崩開未漏液為合格。
(3)熱密閉性:將n個離心管加入半量純水,蓋好蓋子稱重后放入金屬浴中,65℃或90℃(巴氏消毒),30min,再進行稱重,離心管未變形,管蓋未崩開未漏液,前后重量未變化為合格。
(4)冷密閉性:將n個離心管加入半量純水,放入-20℃冰箱,24h,離心管未變形,管蓋未崩開未漏液為合格。

(5)污染物質檢:將n個離心管分別加入半量陰性純水,蓋好蓋子渦旋1 min后靜置5min,吸取純水作為模板進行擴增,qPCR無擴增為合格。
(6)抑制物質檢:將n個離心管分別加入弱陽性質控物,室溫靜置5min,然后進行提取;RNA核酸,DNA核酸,室溫靜置5min,作為模板進行擴增,qPCR擴增未被抑制為合格。
試劑配制室及樣品處理室宜呈微正壓,以防外界含核酸氣溶膠的空氣進入,造成污染;
可以通過控制進風風量大于排風風量達到正壓效果。
核酸擴增室及產物分析室應呈微負壓,以防含核酸的氣溶膠擴散出去污染試劑與樣品,可以通過控制排風風量大于進風風量達到負壓效果。
在理想情況下,PCR實驗室緩沖間內,可設置正壓,使室內空氣不流向室外,室外空氣不流向室內。
PCR實驗室進風由原有中央空調控制,要求將中央空調風口安裝到,且高度為地面鋪裝好后2600mm處。

如果使用熒光PCR儀,擴增室和產物分析室可以合并。
若房間進深允許,可設PCR內部走廊。需要指出的是在減少室內外空氣交換方面,緩沖間比走廊更有意義。
各個區域之間應具備單向的實驗工藝流、物流、與氣流,形成單向流程的保護屏障,避免實驗之間的相互干擾,防止核酸氣溶膠對實驗過程造成污染產生假性結果。
實驗室的墻體,包括頂棚,應結構牢固、氣密性好;所有陰角宜采用圓弧形線條過渡;墻體內壁光潔、不吸附、耐腐蝕、易清洗消毒;地面材料應滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。