PCR技術的問世使病原體檢測能夠快速、方便地進行。由于PCR技術假陽性率太高，只要有微量病原體存在就可得到陽性結果，這并不能作為診斷依據，只有當一定數量的病原體存在時才有臨床意義。因此，對模板準確定量顯得特別重要，應用熒光技術PCR就能夠快速、準確地得到結果。對于解決學檢測的“窗口期”問題，判斷疾病是否處于隱性或亞臨床狀態，以及檢測不能判定是現癥還是既往時，均可利用PCR進行確定。

示例：新型冠狀病毒核酸檢測。

方法學：熒光PCR法。

用途：用于體外定性檢測新型冠狀病毒的疑似病例、疑似聚集例患者、其他需要進行新型冠狀病毒診斷或鑒別。

檢測基因：新型冠狀病毒（2019-nCoV）ORFlab和N基因、E基因。

標本類型：上呼吸道標本：咽拭子、鼻拭子；下呼吸道標本：呼吸道抽取物、肺泡灌洗液樣本、肺組織活檢標本。

檢測流程：

（1）核酸檢測前的生物安全防護（工作人員個人三級防護的穿戴）→（2）樣本的滅活（56℃滅活30分鐘）→（3）樣本的核酸提取（手工、核酸提取儀）→（4）PCR體系的配制和模板加樣→（5）上機檢測及結果分析→（6）檢測后的消毒。

其他病原體檢測：HIV、甲乙丙肝、HPV、肺支、肺衣、EB病毒、腺病毒、胞病毒、甲乙流、埃博拉病毒、B族鏈球菌。

適合開展的醫院和：兒童醫院、婦幼、兒檢所、第三方、各種級別的有需求的醫院。

輔料的質檢通常是在新一批的輔料到實驗室后統一做一次或者定期（半年或1年）做，因此質檢就包含了驗貨和質檢2個部分。由于輔料的質檢沒有一個統一的標準，一般由各實驗室自行制定，可簡可繁，這里提出一些方法供大家參考和批評指正。

1.外包裝檢查：外包裝應完整無損無污，標識清楚，檢查品名、品牌，貨號，規格、生產日期，有效期、保存條件等信息。

2.內包裝檢查：內包裝物品應與外包裝標識一致，檢查是否有破損，泄漏，內容物是否齊全，是否有相應的使用說明書等。

3.性能質檢：檢測試劑耗材是否與其性能一致，比如吸頭的準確性和氣密性等

4.污染物質檢：檢測試劑耗材是否被常規檢測項目的待檢物污染，這種污染可能是物品生產環節，也可能是運輸或實驗室的保存過程中被污染。

5.抑制物質檢：檢測試劑耗材中是否存在PCR反應的抑制物，比如核酸酶。

需要注意以下問題：

實驗室使用的基因擴增儀，熒光定量PCR儀都是高精度儀器。一旦儀器出現一些溫度或者檢測上的小偏差，則很可能對實驗結果產生較大的影響。因此，學會日常保養和維護是尤為重要的。

1、儀器安置

儀器應安放在濕度較低、灰塵較少并遠離水源和熱源的地方，無腐蝕性氣體或強磁場干擾。

環境溫度建議在18~35℃之間。儀器之間應保持50cm 以上距離，降低儀器之間的影響。

2、樣品臺、熱蓋定期清潔

用95%乙醇配合棉簽、無塵布等工具，清潔樣品臺。之后運行PCR儀，設定保持溫度為50℃，約5~10min，讓殘余液體揮發去除。另外，熱蓋也應該用酒精或純水定期清洗，確保熱蓋清潔，溫控性能良好。對于熒光定量PCR，清潔樣品臺和熱蓋的同時，去除灰塵等雜物，保證光路清潔，降低信號干擾。

3. 使用前預熱

老款的PCR儀的性能比不上新款儀器，使用前需要進行預熱，不僅對儀器維護有好處，還能節約實驗時間。新款的儀器升溫快，但還是建議能在進行實驗前預熱2min，這樣可以有效延長儀器的使用壽命。

4. 定期運行維護

1.PCR儀器需要定期檢測，視制冷方式而定一般半年至少一次。

2.PCR反應的要求溫度與實際分布的反應溫度是不一致的，當檢測發現各孔平均溫度差偏離設置溫度大于1～2℃時，可以運用溫度修正法糾正PCR實際反應溫度差。

3.PCR反應過程的關鍵是升、降溫過程的時間控制，要求越短越好，當PCR儀的降溫過程超過60s，就應該檢查儀器的制冷系統，對風冷制冷的PCR儀要較地清理反應底座的灰塵；對其他制冷系統應檢查相關的制冷部件。

4.一般情況如能采用溫度修正法糾正儀器的溫度時，不要輕易打開或調整儀器的電子控制部件，必要時要請人員修理或利用儀器電子線路詳細圖紙進行維修。